王卉主任：流式細胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細胞的專(zhuān)家共識解讀

2021年8月出版的《中華檢驗醫學(xué)雜志》上，重磅推出了中國中西醫結合學(xué)會(huì )檢驗醫學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì )組織專(zhuān)家編寫(xiě)的《流式細胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細胞的專(zhuān)家共識》。這篇共識由河北燕達陸道培醫院王卉主任和中國中醫科學(xué)院廣安門(mén)醫院劉貴建主任執筆并擔任通訊作者，來(lái)自全國30多家三甲醫院的40多位專(zhuān)家經(jīng)過(guò)研究討論共同完成。

為了讓大家更好了解這篇共識，王卉主任做了解讀。

中樞神經(jīng)系統是多種造血及淋巴系統腫瘤和非造血系統腫瘤容易累及的部位，急性白血病中樞累及發(fā)生率30%左右，淋巴瘤累及率5%~25%。腦脊液檢測是評價(jià)腫瘤中樞神經(jīng)系統受累的重要依據。長(cháng)期以來(lái)認為細胞學(xué)檢查是金標準，然而細胞學(xué)檢查的敏感性較低，特別是在低細胞含量的樣本中敏感度更低，這些情況可能延誤患者的正確診斷和治療。

流式細胞術(shù)是上個(gè)世紀70年代問(wèn)世的重要免疫學(xué)技術(shù)，尤其是近30年來(lái)在血液和免疫學(xué)領(lǐng)域取得快速進(jìn)展，成為不可或缺的診斷工具。腦脊液檢測方法中，流式細胞術(shù)幾乎是目前所有技術(shù)中最快速、靈敏、實(shí)用的技術(shù)，可以極大程度提高腦脊液腫瘤細胞的檢出率。

鑒于腦脊液這種微量細胞標本的檢測不同于骨髓、外周血等常規標本，為了規范操作，減少因技術(shù)層面導致的假陰性、假陽(yáng)性，提高檢測靈敏度和特異性，中國中西醫結合學(xué)會(huì )檢驗醫學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì )組織制定了《流式細胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細胞的專(zhuān)家共識》（簡(jiǎn)稱(chēng)《共識》）

腦脊液檢測腫瘤細胞到底有多重要呢？

王卉主任舉了一個(gè)例子，十年前一個(gè)夜晚，北京一家大三甲醫院焦急的患者父親送來(lái)一份腦脊液標本?；純菏前l(fā)熱和頸項僵直的狀態(tài)，臨床醫生首先考慮的是腦膜炎，王卉主任親自進(jìn)行檢測，正常腦脊液中細胞較少，T淋巴細胞為主，以及少量單核細胞，其他細胞很難見(jiàn)到。該標本中發(fā)現了一群CD45陰性CD56陽(yáng)性細胞。首先考慮非造血系統腫瘤細胞可能性大，后來(lái)連夜做了更多的標志證實(shí)為神經(jīng)母細胞瘤。及時(shí)反饋給臨床醫師，盡快進(jìn)一步完善檢查，最后證實(shí)該診斷，患兒獲得及時(shí)正確的治療，至今狀態(tài)良好。

該病例腦脊液細胞數量增多不明顯，因此其他檢測結果不能提供幫助，流式成為第一個(gè)做出正確診斷提示的技術(shù)。

雖然流式細胞術(shù)檢測腦脊液非常重要，但是檢測的困難程度限制了該項目的廣泛臨床應用。因此專(zhuān)家們就適用范圍、檢測方案、操作中注意事項、發(fā)出合理的報告等幾個(gè)方面詳盡提出推薦方法和推薦強度。

共識指出：急性白血病、淋巴瘤、轉移癌等多種淋巴造血和非造血腫瘤都有可能累及中樞神經(jīng)系統，因此急性白血病、有癥狀的其他腫瘤應盡可能進(jìn)行腦脊液的流式細胞術(shù)檢測。

由于腦脊液無(wú)法大量取材，細胞數量少，細胞存活時(shí)間短等特點(diǎn)，給該技術(shù)檢測帶來(lái)挑戰，因此操作和分析過(guò)程很重要。

腦脊液標本流式細胞術(shù)檢測的要點(diǎn)在于：

1、采集后盡快低溫送檢。最好不要超過(guò)4-8小時(shí)送到，實(shí)驗室接到標本后盡快處理。

2、處理過(guò)程中注意回收每一個(gè)細胞，尤其是標記、離心、洗滌的過(guò)程中，盡量使用尖底EP管或者試管，用吸管或者移液器去上清。

3、注意保持流式細胞儀的管道清潔。注意體現為日常儀器保養，以及上樣前注意沖洗進(jìn)樣針和管道，避免管間污染。

4、方案設計中，注意覆蓋常見(jiàn)疾病重要診斷相關(guān)標志，并且因為胞漿染色處理過(guò)程復雜，容易丟失細胞，所以盡量使用胞膜抗體替代胞漿抗體，除非細胞量大，或者不可替代的情況下，才會(huì )使用胞漿抗體。

5、獲取前，使用血液標本調整好儀器條件，避免用珍貴的腦脊液標本調整儀器條件。

6、獲取過(guò)程中，注意盡可能收集所有腦脊液細胞。但是也要避免獲空。

7、分析過(guò)程中，注意正確識別非特異性染色、死細胞與真正的細胞。

8、報告的時(shí)候，因為腦脊液標本細胞數量少，而流式細胞術(shù)對于細胞檢測真實(shí)性有效性的判斷，一般是要求最少20-25個(gè)有效細胞（特殊情況下，有人提出10個(gè)細胞聚集、背景干凈，可以判斷有效），因此除了報告腫瘤細胞的比例，還要求給出細胞數，就是為了準確判斷腫瘤負荷和報告的可靠性。比如同樣20%腫瘤細胞，一個(gè)報告是8個(gè)細胞，一個(gè)報告是2000個(gè)細胞，前者結果可信度不高，后者是有效報告。

鑒于臨床實(shí)際工作當中，大家所用機型不一致，如四色流式、八色流式、十色流式，甚至20多色的全光譜流式。雖然目前主流機型是3激光8-10色，但是為了讓共識更具有適用性、可行性、普及性，筆者提供了不同方案供大家選擇。對于這種方案推薦，共識中尊重每一個(gè)單位，采取建議參考的方式。

共識中建議大家隨報告提供彩色圖片，因為腫瘤是一個(gè)重大疾病，治療過(guò)程漫長(cháng)，患者經(jīng)常會(huì )轉院和會(huì )診，并根據初治免疫分型進(jìn)行隨訪(fǎng)，所以經(jīng)常會(huì )需要報告供同行參考。彩色圖片是提供給同行參考的重要圖像依據。

總之，流式細胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細胞非常重要，為了更好地讓每個(gè)有條件的實(shí)驗室做好流式細胞術(shù)檢測腦脊液標本，王卉主任和劉貴建主任代表中國中西醫結合學(xué)會(huì )檢驗醫學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì )組織眾多行業(yè)內著(zhù)名專(zhuān)家完成了這個(gè)共識。希望給臨床醫師提供快速、準確的報告，從而讓患者盡早獲得精確診斷和適當治療。